產(chǎn)品詳情
吉林高效空氣過濾器,細(xì)胞培養(yǎng)實驗室,高效過濾器--高效空氣過濾器在細(xì)胞培養(yǎng)實驗室相關(guān)的技術(shù)應(yīng)用，胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells,ES）的體外培養(yǎng)要求增殖的同時保持未分化的狀態(tài)，因此，我們要進(jìn)行體外培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞，必須環(huán)境中滿足兩個條件：細(xì)胞生長因子和分化抑制因子。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞可以分泌細(xì)胞生長因子和分化抑制因子，前者可以促進(jìn)ES細(xì)胞的增值，后者可以有效的抑制ES 的自主分化。目前，可以用來制作飼養(yǎng)層的細(xì)胞有多種，其中原代小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（mouse embryonic fibroblast, MEF）取材方便，易于鋪層，分泌能力強(qiáng)而成為ES 細(xì)胞的飼養(yǎng)層細(xì)胞。
將原代培養(yǎng)的MEF 細(xì)胞進(jìn)行傳代，多為3－6 代，這樣不僅可以使得MEF 細(xì)胞高效空氣過濾器的純度較高，而且生長狀態(tài)也很好。在制備飼養(yǎng)層前將MEF 細(xì)胞用絲裂霉素C 或射線照射預(yù)處理，抑制DNA 的復(fù)制使其在保持分泌功能的基礎(chǔ)上失去增值能力，以免與ES 的生長發(fā)生競爭。在具體實驗中，MEF 細(xì)胞的原代分離時胎齡的選擇，作為飼養(yǎng)層使用時細(xì)胞代數(shù)的選擇，絲裂霉素處理的濃度都會影響飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的質(zhì)量。
胎齡過大，則成纖維細(xì)胞的成分降低，分離效率低下，且易混雜其他細(xì)胞，難以去處。若胎齡過小，胚胎形態(tài)小，軀干部分不易分辯，操作困難。細(xì)胞代數(shù)過多，則出現(xiàn)衰老征象；細(xì)胞代數(shù)過少，不容易純化。絲裂霉素的濃度處理和處理時間直接影響細(xì)胞的狀態(tài)。www.rfilter.com
【實驗材料】
小鼠（7-8 周齡雌性小鼠 10 只， 4 周齡雄性小鼠20 只）
【實驗試劑】
細(xì)胞培養(yǎng)液：DMEM-High glucose 4.5g/l+10%胎牛血清+青霉素+鏈霉素
L-谷氨酰胺2mmol/L
PBS 液
消化液：含0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
凍存液：細(xì)胞培養(yǎng)液+10%DMSO
絲裂霉素C 20mg/L
【實驗方法與步驟】
1.MEF 的獲取高效過濾器
（1）處理小鼠，同期發(fā)情和超數(shù)排卵（2）2：1 合籠過夜（3）取出有陰道栓
的開始記時間為0.5 天（4）取出妊娠12.5-14.5 天的小鼠為實驗材料（5）無菌取
出胚胎（6）去除頭、尾、內(nèi)臟和四肢，僅留軀干部（7）用眼科剪刀剪成1mm3組
織塊（8）0.25%胰蛋白酶消化20min/室溫，每隔5min振蕩一次（9）過濾（200 目
篩網(wǎng)）并收集濾液（含有單個的MEF）
2. 接種并進(jìn)行原代培養(yǎng)
（1）細(xì)胞計數(shù)，按照1*105個/ml接種于培養(yǎng)瓶中（2）48 小時換液，4-5 天后傳代高效空氣過濾器,細(xì)胞培養(yǎng)實驗室,高效過濾器
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